ELISA定量检测初乳中抗PEDV IgA抗体的研究及其在监测种猪群PEDV抗体保护力中的应用

来源：湖南新南方养殖服务公司 2015-05-28 16:50:07| 查看：次

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　　摘要

　　2013年，猪流行性腹泻病毒（PEDV）通过引种传入北美，迫切需要建立可靠的PEDV诊断方法。基于PEDV S基因的S1部分，最近本小组研发了酶联免疫吸附法（ELISA）。采集239个场的血清样品，用S1-酶联免疫吸附法（s1-ELISA）进行诊断，敏感性为100%，诊断的特异性为94%。通过初乳获取被动免疫可保护4-14日龄的哺乳仔猪。研究发现，母乳中的IgA抗体滴度高，为哺乳仔猪对抗肠道冠状病毒提供了保护力，如猪传染性胃肠炎（TGEV）和猪流行性腹泻病毒（PEDV），而母乳中的IgG抗体通常不足以保护哺乳仔猪，血清中的中和抗体亦不足以保护初生仔猪。本研究选用已知PEDV情况场的初乳样品，监测PEDV保护力，改进现有的以IgG为基础的PEDV ELISA检测方法，检测初乳和奶水中的IgA。

　　材料和方法

　　本实验所用的133份母乳样品来自3个不同猪群。102份为PEDV阴性场的初乳样品，是2010年以来从爱荷华州的两个猪场收集的，这两个猪场的猪传染性胃肠炎（TGEV）和猪呼吸道冠状病毒（PRCV）感染情况是未知的。另外31份样品为PEDV阳性场的初乳样品，是2013年11月从爱荷华州的一个猪场收集的，该场于当年5月份感染了PEDV，已知该场的PRCV阳性和TGEV阴性。

　　随着ELISA的发展，将现有的用于检测IgG PEDV S1蛋白的ELISA法被稍加改进并用于初乳的检测。具体来说，所有样本都监测了抗-PEDV IgA和IgG，并对其结果进行了比较。

　　结果

　　在初乳样品中， PEDV阳性场的样品，抗-IgG PEDV抗体阳性率为90.3%（28/31），抗-IgA PEDV抗体阳性率为100%（31/31）；而PEDV阴性场的样品，抗-IgG PEDV抗体阳性率为8.9%（9/102），抗-IgA PEDV抗体阳性率为0（0/102）。结果显示，以IgA为基础的测定方法特异性更高（如图1）。

　　图1阳性场和阴性场初乳样品PEDV IgA ELISA检测结果分布，分析截止=黑线

　　结论与讨论

　　血清中IgG抗体的存在，与其对抗主要在粘膜表面复制的病原体如PEDV、为小猪提供的保护力不是正相关的。在这种情况下，检测初乳或普通乳汁中的IgA可能是合适的。由于目前美国没有可用的PEDV疫苗，给妊娠母猪返饲PEDV阳性仔猪的肠道及其内容物，人为地刺激乳源免疫力，试图减少PEDV的持续时间和发病规模。然而，因为肠内容物的PEDV病毒滴度的非同源性，整个猪群的乳源免疫力感应是不一致的。因此，监测初乳和普通乳汁中的IgA浓度对保证仔猪获得足够的被动免疫很重要。本研究建立的检测IgA初乳抗体的S1-ELISA法为监测PEDV被动免疫提供了特异和敏感的方法。哺乳期间分泌到乳汁中的IgA抗体持久性还需进一步研究。

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