25-羟基胆固醇在猪黄体化的体外颗粒细胞内调节孕酮的生成

来源：湖南新南方养殖服务公司 2015-05-14 15:43:04| 查看：次

中国养猪网讯：

　　引言

　　孕酮(P4)是卵巢细胞合成和分泌的一种类固醇激素。其maiA118n功能是为胚胎植入提供子宫内膜。除了其他因素，植入的成功与否依赖于孕酮合成的调节，因此植入时孕酮的浓度不足，会增加胚胎的死亡率。在大鼠和灵长类动物的黄体细胞中孕酮生产的体外研究中，25-羟基胆固醇作为模拟氧固醇，表现出抑制效应，这归因于CYP mRNA的下调。测定25-羟基胆固醇影响的颗粒细胞培养模式，目前在众多激素调节研究中起着显著地作用。因此，本研究的目的是确定在猪体外黄素化的颗粒细胞中，25-羟基胆固醇对孕酮生成的影响。

　　材料和方法

　　颗粒细胞由母猪发育前的卵巢细胞获得。为了使颗粒细胞黄体化，颗粒细胞在37 °C、相对湿度95%和5%CO2的环境中培养96小时。前48 h用MEM培养基和胎牛血清(FBS)培养，后48 h只用FBS培养。一旦黄化，加入10 ug/mL的25羟基胆固醇(Sigma)。对照培养物只用普通培养基孵育。试验进行3次独立的重复，处理的运用在每个重复做3次。分别在24 h和48 h收集培养基的上清液，以测定孕酮的生成。使用由德国DGR Intruments GmbH公司生产的EIA试剂盒-1561 08/07量化孕酮水平。国际DGR(马尔堡Frauenbergstr公司，18 , D-35039)分离是基于竞争性结合的原则。个体间比较运用T检验，显著水平为P < 0.05。

　　结果

　　加入25-羟基胆固醇的培养介质中，孕酮的生成量增加。用10 ug/mL 25-羟基胆固醇处理的细胞，与未处理细胞或者对照组相比(24 h浓度为2.04 ng/mL，48 h浓度为7.68 ng/mL)，孕酮量在24 h(27.89ng/mL)和48 h(26.94 ng/mL)均增加3倍以上，孕酮增加量显著(p <0.05)。对比处理组24 h和48 h的数据，差异不显著(p > 0.05)。

　　结论与讨论

　　Travert等(2006)发现大鼠睾丸间质细胞能够使用25-羟基胆固醇作为前体合成睾酮。其他研究表明，使用免疫程序能够在用25-羟基胆固醇培养的猪颗粒细胞以及牛黄体细胞中探测到孕烯醇酮的生成。Babischkin等(1997)也发现在人类胎盘合体滋养层细胞中25-羟基胆固醇和孕酮的转化。总之，本研究表明，25-羟基胆固醇在猪黄素化的颗粒细胞中可以作为底物用于孕酮的生物合成。我们认为，这种作用是通过孕烯醇酮直接转化实现，可能是因为25-OH可以从侧链切割，与酶链分离，快速通过线粒体膜。再者，我们可以假设，25-羟基胆固醇可以作为孕酮生物合成的前提，可能是由于其调节一些类固醇基因的表达来实现的。

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