在接种CIRCOVAC®疫苗仔猪中PCV2的迟发型超敏反应试验和PCV2特异性IFN-γ反应之间的相关性

来源：湖南新南方养殖服务公司 2015-05-12 17:39:27| 查看：次

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　　介绍

　　作为一种测试细胞介导诱变免疫力的方法，迟发型超敏反应(DTH)试验已经使用了几十年，尤其是人类结核菌素皮肤试验在临床上已经证明了其实用性。初步试验表明，用CIRCOVAC接种的小猪使用CIRCOVAC抗原悬浮的DTH 试验产生了良好的效果，因而用来评估疫苗适用性。本研究的目的是在白细胞介素-细酶联免疫斑点实验中，DTH反应的强度是否与抗PCV2的全身细胞介导免疫反应有关。

　　材料和方法

　　选定19头3周龄仔猪并分成两组：A(N =9)和B(N =10)。A组仔猪肌肉注射0.5毫升重配的CIRCOVAC(一种灭活的PCV2全病毒);B组仔猪肌肉注射1毫升的以杆状病毒为载体的亚基因型PCV2疫苗;4周以后，增加一个3周龄未接种疫苗的C组(N=5)，对腹部区皮内接种0.1毫升CIRCOVAC的抗原悬浮液(DTH试验)。

　　抗原接种后18小时，对DTH反应进行评估，以接种红斑的变化作为主要参数，水肿和硬结是附加参数。使用数字卡尺测定红斑的直径(D)，计算受影响的面积，并用平方毫米表示。

　　同时，为了获得外周血单核细胞(PBMC)，收集肝素化的血液样品。采用4515个碱基重叠的PCV2 ORF2肽(每肽5 ug/mL)的ELISPOT来测定PCV2特异性IFN-r-分泌细胞(IFN-r-SC)。作为对照，三个不相干肽
链也包括在内。

　　DTH反应的平均大小(红斑区)和 PCV2病毒特异性IFN-r-SC的平均数值分别使用非参数检验进行比较。采用皮尔逊测试计算DTH试验和PCV2特异性反应酶联免疫斑点法之间的相关性。

　　结果

　　皮内接种后，除了B组的1头猪外，其他所有的猪都形成同样程度的红斑。其中，仅1头猪反应呈硬结，没有水肿。A组(CIRCOVAC)红斑面积显著高于其他组(表1)。

　　对于接种疫苗的群体之间IFN-r的酶联免疫斑点差异是不显著的(表1)。

　　DTH试验和IFN-斑联免疫斑点的显著相关性只在A组观察到：

　　DTH试验= 15.335467，酶联免疫斑点+51.064127。

　　R2 = 0.49;P <0.05。

　　结论与讨论

　　皮内注射抗原可引起某种程度的红斑，甚至在未接种疫苗的猪也可见。这是常见皮内测试(例如结核菌素测试)，并且根据不同情况(年龄、先前体况、母源抗体等)，需要一个或多个判定界限。本研究表明，
使用疫苗的A组，其皮肤反应的强度是特定的，从而实现起初一致性测试的要求。ELISPOT显示的DTH实验相关性很低，这表明观察到的IFN-γ反应只有一部分参与到皮肤试验中。这是一个初步试验，有待将来
的进一步研究。

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