伪狂犬病病毒基因缺失及活伪狂犬病病毒基因缺 - 兽药常识_兽药基本常识_兽药的使用方法_如何使用兽药_养猪用药安全

伪狂犬病病毒基因缺失及活伪狂犬病病毒基因缺

来源： 2016-03-02 17:51:24| 查看：次

摘要：病是由病病毒引起的多种畜、禽及野生动物的一种以发热、奇痒、脑脊髓炎为主要症状的急性。该病每年给业造成的损失达数十亿美元，目前对该病主要是以防制为主。随着基因工程的不断更新和发展，研制更加安全、有效的基因工程对该病的防治将会有重要的意义。文章对伪狂犬病基因缺失疫苗及活载体疫苗的研究进行了综述。

关键词：伪狂犬病病毒；基因缺失疫苗；活载体疫苗

伪狂犬病病毒（Pseudorabies virus，PRV）可引起家畜和多种野生动物的伪狂犬病，临床上以的神经症状、严重的疾病以及发生流产、死产和产仔数下降等症状为特征，耐过猪增重减慢。伪狂犬病是危害我国业发展最为严重的传染病之一。目前主要采用接种疫苗防制该病。

PRV是疱疹病毒科、疱疹病毒甲亚科、水痘病毒属的成员，与其同属的还有1型牛疱疹病毒（BHV-1）、马疱疹病毒（EHV）以及水痘带状疱疹病毒（VSV）。PRV基因组为线性双股DNA，约150 kb，由长独特区（U-L）和短独特区（US）及U S两侧的末端倒转重复（TR）与内部重复（IR）组成，可编码70种～100种蛋白质，成熟的病毒粒子约有50种蛋白。在上述基因产物中，U L区段中的gC、TK及U S区段中的PK、gG、gI、11K和28K为病毒增殖的非必需成分，TK、gC、gI、PK和CP（衣壳蛋白）等与PRV毒力相关。TK基因缺失株的神经毒力明显降低，如果与其它的毒力基因（如gE）联合缺失时，PRV强毒即可变成为一个双基因缺失弱毒疫苗株[1]。

1 伪狂犬病基因缺失标记疫苗

伪狂犬病基因缺失疫苗的研制始于20世纪80年代初期，即利用基因工程技术在PRV基因组中插入或缺失一段序列，致使PRV的某些基因不能表达，从而使PRV的毒力减弱，同时又保持其较强的免疫原性。

世界上第一个获得批准使用的基因工程缺失疫苗就是伪狂犬病TK缺失疫苗株BUK-d13，它是以PPV BUK株为起始材料，通过缺失TK基因序列的148 bp而获得[2]。BUK疫苗株是将其亲本病毒通过鸡胚细胞传代800代以上获得的，其US区的gE基因存在缺失。因此，BUK-d13除了TK基因缺失外，还有来自BUK疫苗株的gE缺失。该毒株在细胞培养物上，即使在含有HAT的选择条件下也不能回复为TK+。Kit S等[3] 在PRV BUK-d13株的基础上删除gC基因的1 100 bp片段，构建出了TK－/gE－/gC－的PRV gC /TK株。

Marchioli C C等[4] 和Van Zijl M等[5] 分别构建了缺失TK和gG基因的PRV疫苗株和缺失TK和gE基因的疫苗株（783株）。Mettenleiter T C等[6]报道，在建立表达PRV gD基因细胞系的基础上，从PRV的BamHI－7片段中缺失了5.1 kb的片段（含有gG、gD、gE、gI基因的编码序列），构建出了PRV的gG－/gD－/gE－/gI－的四基因缺失株PRV 376株。王琴[7] 构建了基于PRV Fa株的TK基因缺失株。

颜其贵等[8] 构建了PRV Fa gI－/gD－?基因缺失株，小鼠试验证实缺失株对小鼠具有一定的免疫原性。周复春[9] 构建了一系列基因缺失株（PRV Ea TK－、TK－/LacZ+、TK－/gG－/LacZ+?等）。

Liu Z等[10] 将LacZ基因表达试剂盒插入到PRV Ea株基因组的gE区，通过蓝斑筛选和纯化，得到了TK－/gE－/LacZ+　 PRV。利用LacZ基因处的Eco-RI酶切位点来消化PRV Ea TK－/gE－/LacZ+?基因组DNA，并与质粒pFBBS在PK-15细胞上进行共转染。经过蚀斑纯化得到了TK－/gE－/gD－ PRV。通过小鼠试验表明，此TK－/gE－/gD－ PRV的毒力明显减弱。

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