用MLV分析临床样品猪肺炎支原体分子类型

来源：湖南新南方养殖服务公司 2015-05-11 17:28:01| 查看：次

中国养猪网讯:

　　前言

　　猪地方流行性肺炎是引起世界养猪生产损失的重要疾病之一，猪肺炎支原体是引起该病的病原。已有研究报道，猪群中传播的猪肺炎支原体菌株具有多样性。一种可以调查疫情、了解细菌的致病机制和流行病学以及评价该病防控措施的方法是十分必要的。因此，本研究目的是根据2个重要粘附素P97和P146的重复序列数，标准化猪肺炎支原体菌株的分化测定，并调查在美国流行的猪肺炎支原体遗传变异性。

　　材料和方法

　　6个月内，本研究共提交209份临床样品给UMN-VDL。通过以前建立的方法标准化MLVA(多位点串联重复序列分析)。分析对象为猪肺炎支原体的2个粘附蛋白(P97和P146)的重复序列数。合成下游PCR荧光标记引物，并扩增目的基因。每份样品10微升按1:32稀释，并进行毛细管电泳。毛细管电泳分析失败样品通过标准Sanger法测序，样品分析中手动计算重复基因。用Bionumerics 7.0版分析MLAV。

　　结果

　　电泳图中根据条带大小和染色，可以清晰鉴定出2个基因位点，并依据重复序列数转化为绝对数值。试验中Simpson多样性指数：P97 D=0.908，P146 D=0.929，这2个位点组合 D=0.979。本研究中所有样品的2个组合位点分析显示87个MLVA类型(图1)。MLVA类型根据每个位点重复序列数命名，分别为P97-P146。最常见MLVA类型为9-26(7.2%)，随后依次为15-25(6.2%)、15-21(5.2%)、11-15(4.7%)和14-21(4.3%)。明尼苏达州观察到54个MLVA类型。没有根据猪场分布州进行观察分类。

　　结论及讨论

　　本研究中，我们实验室进行标准化MLVA试验并发现大量MVLA类型，表明在美国猪群和州水平上正在流行多重变异型猪肺炎支原体。如果高致病性菌株存在基因型非随机性分布的情况，那么需要从不同地理位置和疾病类型采集样品进一步纵向分析调查。

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