4周龄仔猪口鼻接种PEDV后：病毒组织嗜性、排毒模式、病毒携带、抗体反应和气溶胶传播研究

来源：湖南新南方养殖服务公司 2015-06-09 17:08:35| 查看：次

中国养猪网讯:

　　前言

　　猪流行性腹泻病毒（PEDV）最近在美国出现流行，本研究的目的是研究在4周龄种猪口鼻接种PEDV病毒后PEDV病毒的组织定位、排毒方式、病毒携带、抗体反应和气溶胶传播等。

　　材料方法

　　实验动物：从健康状况良好的猪场获得33只3周龄PEDV阴性猪，在进行接种病毒前一星期进行环境适应饲养。本研究是在堪萨斯州大学生物安全研究中心进行，按照BSL2制度要求进行的。A组23只猪接种
了PEDV病毒。B组5只没有接种PEDV病毒，但是在A组接种大约6小时后与A组混到一起饲养。C组为气溶胶传播组，设立5只不接种的猪，但是用隔离的猪栏与A、B组在同一个圈舍中饲养。

　　攻毒：攻毒材料是由肠道分离的小肠内容物，攻毒材料曾在商品猪场中作为“返饲”接种物用于控制发病。接种物的PRRSV和PCV为阴性，PEDV核酸“CT滴度”为22。

　　A组攻毒动物在4周龄时通过口腔和鼻腔分别接种5mL接种物。接种后，每天对动物进行临床症状观察，在接种前和接种后0-7天、9天、14天、21天、28天、35天和42天分别进行鼻拭子、粪便拭子和血清样品采集。同时对A、B、C组的动物进行猪栏内唾液样品的采集。

　　通过对粪便拭子、鼻拭子和唾液样品进行实时PCR监测PEDV排毒。并通过血清样品检测病毒血症和抗体反应。

　　分别于接种后0天、2天、4天、7天、9天、14天、21天、28天、35天和42天在A组中随机采集新鲜固定的组织样品，监测组织中病毒的嗜性和组织的病理变化。

　　结果讨论

　　实验结果数据显示如下：

　　轻微的临床症状在接种后2天出现，在8天时回复正常。

　　接种48小时后粪便拭子和鼻拭子的PCR检测为阳性。

　　粪便拭子检测的排毒高峰期出现在攻毒后5到6天，并且显著的高于鼻拭子检测的排毒量。

　　A和B组中的大部分动物在接种21天后粪便拭子和鼻拭子检测为阴性，部分动物排毒时间可持续到接种后35天。

　　C组中尽管可以在一些动物的鼻腔和唾液中检测到PEDV核酸，但是气溶胶传播组并没有出现大量的传染。

　　在接种后14天时对室内环境样品进行了收集，数据显示，在攻毒房间内，接种组和气溶胶组的墙壁、猪栏、食槽中均有大量的病毒核酸。鉴于可能出现的假阳性PCR反应，可疑的样品都进行了重新检测，
并且对PCR产物都进行了测序以确定是否为PEDV特异性的PCR产物。所有的可疑反应都显示了PEDV病毒核酸的存在。

　　在接触组的5只中有3只，22只接种组动物中有9只明显的检测到病毒血症，在气溶胶传播组中没有检测到病毒血症出现。

　　原始数据显示，病毒血症的出现与粪便、鼻腔排毒期的延长可能有一定的相关性。

　　血清学数据（间接免疫荧光试验）显示，接种之前的样品均为阴性，在所有的接种组和接触组中血清抗体有显著阳性转变。

　　尽管在气溶胶传播组的鼻腔和唾液样品中可以明显的检测到PEDV核酸，但是并没有确切的证据显示血清抗体有阳性的转变。

　　间接免疫荧光试验的结果与用大肠杆菌表达的N蛋白ELISA结果和正在开发的荧光微球免疫测定结果完全符合。

　　组织块样品送至ISU，Madson博士进行PEDV免疫组化评价。唯一的一份PEDV抗原阳性样品是由胃肠道组织中检出。鼻甲、气管、肺、支气管淋巴结、脾脏和其他内脏组织均为免疫组化检测阴性。

　　1套完整的血清样品（1200份）提供给5个实验室进行检测，另外3套完整的唾液和组织样品提供给其他实验室检测。

　　从之前提供给3个实验室的冷冻小肠组织样品中分离病毒的尝试仍在进行中，目前还没有取得成功。

　　由本研究的实验结果显示气溶胶传播并没有出现。实验结果好像与气溶胶传播领域的报道相矛盾，但是缺乏活体动物试验验证。为了探究PEDV的传播方式和受影响因素，比如对PEDV的消毒剂和紫外灭
活、易感动物（保育猪与断奶仔猪）对病毒的敏感性，感染剂量和暴露途径等还需要进行研究。