墨西哥蝙蝠中疑似猪腮腺炎样病毒的检测与分离

来源：湖南新南方养殖服务公司 2015-06-09 16:41:29| 查看：次

中国养猪网讯:

　　前言

　　蝙蝠与许多新出现的传染性疾病有关，它是许多病毒的宿主并且使这些病毒具备了跨种传播以及感染人类、家畜和野生哺乳动物的能力。回顾性分析显示，在美洲大陆存在两种不同的新的副粘病毒，它们从属于腮腺炎病毒属。其中一种是马普埃拉病毒（Mapueravirus），该病毒是1979年在巴西的一只健康狐蝠的唾液腺中分离到的；另外一种是猪腮腺炎病毒（PorPV），它出现于20世纪80年代的墨西哥，是一种新的副粘病毒，并已经确定它能够在猪上引起叫做“蓝眼病”（BED）的疾病。序列和基因组结构比较结果表明PorPV-LPMV与MprPV相近，系统发育研究表明PorPV-LPMV可能来自于一种未知的野生宿主。该研究的目的是确定在自然界中蝙蝠是否是PorPV的宿主。

　　材料和方法

　　在两个不同的但同时爆发BED的区域（一个地区在北纬18°42´32.4”，西经99°14´14.1”，1004MASL的海拔；另一个在北纬18°46´14.33”，西经98°51´55.95”，1403MASL的海拔，位于墨西哥的中部地区（莫雷洛斯州））共捕获了20只蝙蝠（4只虫食性的帕氏髯蝠；12只牙买加菓蝠；2只圆头叶蝠；4只小囊翼蝠）。根据环境和自然资源部的许可证FAUT-0211收集捕获蝙蝠。按照动物护理和伦理委员会的伦理指导原则在墨西哥城进行所有的动物研究。通过血清-病毒中和试验及免疫过氧化物酶单层细胞试验检测血清样品。病毒的分离是将冷冻的脑组织样品在MEM培养基混匀到10%（w/v），然后接种到MDCK细胞单层。96h之后观察培养细胞是否出现细胞病变（CPE），并通过免疫荧光试验进行分析。按照说明书，使用TRIzolLS试剂提取细胞总RNA。设计RT-PCR扩增引物来扩增PorPV-HN基因（基因库登录号：S77541）中的一段613bp保守区域，并将其与先前基因库已经公布的PorPV-HN基因序列进行比较。对PCR凝胶产物进行纯化，并使用ABIPrism3100DNA基因测序分析仪进行双向测序。使用ClustalWv.1.8软件进行多重序列比对。

　　结果

　　血清学分析表明在8只蝙蝠中存在针对PorPV的中和抗体（抗体效价在1:20至1:1280之间），其中有两只帕氏髯蝠、三只牙买加菓蝠、两只圆头叶蝠和一只小囊翼蝠。通过RT-PCR从15个脑组织样品中扩增HN基因片段，并对其中四个样品使用免疫荧光试验检测感染细胞培养物中的PorPV抗原（两只牙买加菓蝠和两只圆头叶蝠）。PCR产物的序列分析表明：以上所分析的600个核苷酸区域中，从蝙蝠中分离到的所有序列与最初的PorPV-LPMV株有99.7%的氨基酸同源性，与抗原变异株PAC4有100%的同源性，这表明它们属于同一毒株。

　　结论和分析

　　在该研究中，我们分离到了如前面所描述的猪腮腺炎样病毒，并且证实了蝙蝠中存在PorPV的RNA片段。这株病毒是从脑和感染细胞培养物中分离得到的。这些发现表明在自然界中蝙蝠能够作为PorPV的宿
主。在不同的蝙蝠样品中检测该病毒的抗体将有助于我们进一步了解PorPV的进化、跨种传播机制及在不同动物物种间的发病机制。

---养猪网手机APP端

相关阅读 猪腮腺炎

节省药费秘诀：探索韭菜和大葱在夏季猪病治疗中的多种用途2024-05-17
猪肌肉注射的正确位置，养猪人你学会了吗？2024-05-14
母猪、小猪、中大猪因疾病几天不食，该如何治疗？2024-05-14
猪病了，如何用药？记住这7种猪病的特效药2024-05-10
眼睛是心灵的窗户，透过猪眼捕捉到猪病的信号！2024-05-10

精华推荐

蓝耳防控

推荐阅读

视觉焦点