ELISA检测血清和/或唾液样品中非洲猪瘟rp30抗体方法的建立
来源：湖南新南方养殖服务公司 2015-06-09 16:38:24| 查看：次前言
非洲猪瘟病毒（ASF）能够引起高死亡率，对经济产生严重影响并且会急速传染周边区域，这使其成为了一种备受关注的病原。由于缺少有效的疫苗，使得预防和控制ASFV变的十分困难。由于感染之后抗
体是一个明确指示感染的标志物，并且在相当长的时间内可以监测，因此血清学对于ASFV的诊断和监测是十分有用的。
早期的研究显示，在唾液中可以检测到ASFV抗体并表明唾液可以作为一种合适的样品用于ASFV的监测。该研究的长期目标是继续开发ASFV抗体ELISA检测方法。几个ASFV蛋白已经确认具有高度的抗原
性，例如p72、p30、p54及其它一些蛋白。在该研究中，选择了一个重组p30多肽（rp30）用于间接ELISA。
材料和方法
将含p30基因的质粒在大肠杆菌中进行超表达，通过镍柱纯化了融合His标签的p30多肽。ELISA条件，例如：rp30包被/封闭条件，样品的稀释，缓冲液及孵育时间均需要优化以检测血清和唾液样品中的抗
体。将分离得到的能产生慢性感染的ASFV弱毒株接种9只猪，血清和唾液抗体阳性样品则是通过这些实验培养的猪所得到的。在培养后的不同天数，按照先前所描述的方法分别从不同的猪采集成对的唾液和血
清样品（DPI分别为0、6、12、15、19、26、33、40、47、54、61）。
使用已知的ASFV阴性样品来评估ELISA的特异性。例如：200份唾液和200份血清样品由爱荷华州立大学兽医诊断实验室递交，这些样品来自于美国的猪群并且已经经常规诊断方法检测。
结果
图1 接种非洲猪瘟病毒NHV株后血清和/或唾液样品的ELISA平均OD值
图1显示了血清和唾液中ASFVrp30抗体ELISA的平均OD值。在DPI为12天的时候，检测血清和唾液中的IgG抗体。已知的ASFV阴性样品的评估结果表明血清和唾液样品的特异性分别为99.5%和100%。
结论和讨论
ASFVrp30抗体ELISA的初步评估表明该方法可以检测唾液和血清中的ASFV抗体，并且均具有很高的特异性。事实上，来自同一头猪的血清和唾液样品可以同时在同一块板子上进行操作。考虑到该方法能够
提高唾液样品的监控效率及血清样品检测的可靠性，在保证监测ASFV的条件下ASFVrp30具有很大的应用前景。
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