评价环介导等温扩增法检测试验和自然感染猪只粪便中的胞内劳森菌
来源：湖南新南方养殖服务公司 2015-06-04 16:39:42| 查看：次
中国养猪网讯：
前言
胞内劳森菌，增生性肠病的病原菌，是一种专性的细胞内细菌。可通过聚合酶链式反应对含有该病原菌的粪便进行常规检测。环介导等温扩增法是一个基因扩增的方法，这种方法是在恒温条件下，使用一个单一的酶进行，可以直观地进行评估。与聚合酶链式反应试验相比，环介导等温扩增法试验具有对专业知识、成本和设备要求都达到最低化的潜力。我们通过检测实验感染和自然感染猪的粪便中胞内劳森菌的实验，对这两种实验方法进行了比较。
材料和方法
粪便样本来自111头猪，它们已经通过实验感染了胞内劳森菌(n=55)或假装感染(n=56)了胞内劳森菌，收集它们的粪便用来通过聚合酶链式反应和环介导等温扩增法实验进行评估。另外，每2周一次从两个有增生性肠病的生产单元收集254份粪便样本，进行常规的聚合酶链式反应和环介导等温扩增法检测。充分利用已知含有和没有胞内劳森菌的粪便样本进行环介导等温扩增实验优化。用一个试剂盒提取所有粪便样本中的DNA。用10倍稀释后的胞内劳森菌对环介导等温扩增实验和聚合酶链式反应的灵敏性进行了评估。通过猪肠道内微生物，正常排泄物菌群及胞内劳森菌遗传相关的菌株(沃氏嗜胆菌)进行特异性分析。对人工感染和自然感染的猪粪便样本进行胞内劳森菌检测，环介导等温扩增实验的诊断敏感性、特异性和精确度与传统的聚合酶链式反应相比都具有优势。
结果
对传统的聚合酶链式反应和环介导等温扩增实验的灵敏度(检测最低值)进行检测，分别为标准样品中102和103微生物/mL。来自猪病原体、正常的粪便菌群或者沃氏嗜胆菌的DNA检测没有交叉反应。以常规聚合酶链式反应作为标准，环介导等温扩增实验的敏感性和特异性，对人工感染猪的粪便进行检测，分别是71%和100%;对自然感染猪的粪便进行检测，分别是35%和100%。分别用聚合酶链式反应和环介导等温扩增实验对人工感染或自然感染猪粪便样本检测，一致性的检出率分别是79%和76%。
结论和讨论
本实验主要是用环介导等温扩增实验对含有胞内劳森菌的粪便样本进行了检测，并对其有效性进行了评估。虽然以前的研究表明环介导等温扩增实验的灵敏度高于常规的聚合酶链式反应，但我们的研究发现，样本经10倍稀释后，环介导等温扩增实验的灵敏度低于聚合酶链式反应。然而，环介导等温扩增实验的特异性要好于常规聚合酶链式反应。用环介导等温扩增实验对自然感染猪粪便样本检测的灵敏度较低，可能是由于与人工感染猪的粪便样本中相比，自然感染猪的每克粪便样本中的胞内劳森菌浓度较低。常规聚合酶链式反应和环介导等温扩增实验二者有一个很好的一致性，相比聚合酶链式反应，它具有很高的特异性(100%)。环介导等温扩增实验确实显示，在栏舍内或自然条件下，以及在有限的实验室内具有使用潜在性。然而，在自然条件下，新的引物和酶的制品才能保证增加实验的敏感度。
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