十二种抗菌剂抵御一种口服致弱专性胞内寄生的劳森菌（L.）活疫苗毒株的体外活性研究
来源：湖南新南方养殖服务公司 2015-06-03 17:25:53| 查看：次
中国养猪网讯：
引言
致弱专性胞内寄生的劳森菌(LI)活疫苗—勃林格公司的恩特瑞®猪回肠炎活疫苗，使用时要求无抗生素的干扰，免疫前3天和免疫后3天需要停用抗生素，才能确保该疫苗的免疫效果。然而，某些猪场在使用疫苗预防LI病的同时仍配合使用抗生素，抗生素并未对LI疫苗产生干扰，所以某些抗生素与疫苗的配合使用可能是无相互干扰的、甚至可能是相互促进的。在本研究中，我们通过细胞培养测定了12种抗菌物质对胞外和胞内增殖LI的最低抑菌浓度(MIC)。
材料与方法
改良早期报道的检测系统：取深度冷冻保存的致弱LI活疫苗(恩特瑞 ® 猪回肠炎活疫苗)100微升，接种新鲜的McCoy细胞，56 TCID50 U/mL(半数组织感染剂量，采用胞内和胞外试验先获得易感细胞稳定的、可靠的感染剂量)。
MIC定义为在微量稀释试验中，抗菌物质有效抑制LI生长的最低浓度，每个稀释度3个重复。测定每种抗菌物质在不同稀释度对LI在胞内和胞外增殖的影响。为确保本试验结果的可比性，同时采用两种工作稀释法。由于部分抗菌物质必须用乙醇、氢氧化钠溶液或柠檬酸钠缓冲液溶解，因此还分别测试了这些物质是否影响LI生长，未发现任何影响。
结果
根据MIC值来判定抗菌物质活性(BP，breakpoint)(R=耐药性，S=敏感性)。采用特定的抗LI单抗和FITC(异硫氰酸荧光素)标记，感染孔中至少有5个细胞的内部或周围有不少于5个的LI发荧光，方可判定为阳性。
结论与讨论
建立一种高标准的检测方法，用于检测抗菌物质的MIC或口服致弱专性胞内寄生劳森菌(L.)活疫苗的MIC。
在体外试验中，枯草杆菌肽、新霉素、维吉尼亚霉素和黄霉素不影响LI的增殖。前期用恩特瑞 ® 猪回肠炎活疫苗免疫猪只后，采用美国允许的最高剂量肌肉注射(头孢噻呋：5mg/kg体重，硫酸粘杆菌素：8 mg/kg体重)进行对猪只进行体内攻毒试验，结果头孢噻呋和硫酸粘杆菌素亦不影响LI增殖。
氟苯尼考，替米考星，磺胺类及磺胺增效剂(甲氧苄氨嘧啶)与磺胺类混合剂对LI的增殖有很大的抑制作用。细胞外试验表明，氨苄西林仅在BP点以上浓度时才对LI有抑制作用，然而，细胞内试验的MIC值在BP点以下，但对LI增殖也有抑制作用。
土霉素抑制LI增殖的试验结果与之前体内试验的研究结果恰好相反，先前研究结果是剂量为2.5 mg/kg时不干扰恩特瑞 ® 回肠炎疫苗的免疫效果，表明土霉素的剂量不足以对某些疫苗在肠细胞的作用产生影响。
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