生长猪群sock样本测试的非感染性腹泻的诊断
来源：湖南新南方养殖服务公司 2015-06-03 17:09:33| 查看：次简介
在丹麦养猪业，肠道疾病的治疗是抗生素使用的主要用途1。停止对于猪群暴发非感染性腹泻的抗生素治疗可能可以减少抗生素的消耗。
此前的研究表明对非感染性腹泻猪群的诊断标准，包括在混合粪便样品中病原菌的极限标准为104.5 个/g2。另一种替代混合粪便样本，sock样本，是通过在栏舍周围走动收集并检测的。sock样品可以提供
容易和廉价的定量采集粪便方法来做定量PCR（qPCR）检测。
本研究的目的是通过qPCR检测结果评估混合的粪便样本sock样本之间的一致性。
材料和方法
在不同的丹麦猪群的43个爆发腹泻病例中采集粪便样品。从每个腹泻暴发案例中，兽医随机从不同非药物生长猪（断奶后10-70天）的栏收集20个粪便样本。
收集了大约10份正常粪便样本和10份腹泻粪便。每个粪便样品包括从新鲜粪便沉积得到约2克的粪便。
在相同栏舍里，通过穿上sock靴子在走过所有栏舍收集sock样品（sock标准与已知的干重标准一样）。首先，靴子上覆盖着一次性塑料。其次，靴子上套上的标准干净的sock。然后踩在一间栏舍的所有栏
的漏缝地板的粪便上。为了评价样品的重复性在sock采样10分钟内重复使用一组新的。
将所有粪便和袜子的样品装在一个有冰盒的泡沫箱里，送到哥本哈根国家兽医实验室，样本会在第二天到达。从每个猪场，将这20个独立的粪便样本用磷酸盐缓冲盐水（PBS）稀释至10%，然后按重量平
均混合成一个样本（倒入10%的PBS溶液）。将湿sock样本称重，然后悬浮在PBS中获得10%的溶液，再在Stomacher匀浆器中处理一分钟。将混合样本和sock样本通过PCR检测细胞内劳森菌，肠道螺旋体和
大肠杆菌F4和F18。定量PCR结果进行对数变换（log10细菌/克粪便）。所有的qPCR结果按照低于或者高于104.5/g细菌数分为两份。混合样本与从每个爆发腹泻的第一分sock样品进行比较。从每个爆发腹泻
点收集的两个sock样品进行了比较。所有的比较都是使用Stata IC 13由计算协议和Cohen’s Kappa计算。
结果
总共有860个独立粪便样本（制备43份混合样本）和43份由26位兽医提交的sock样本。混合样本和sock样本之间两份结果的一致性是88% (Cohen’s Kappa= 0.63），79%（n = 34）的混合样本和81%（n
= 35）的sock样本都超过 104.5/g病原菌。在相同的爆发腹泻点的两个sock样品之间两份结果的一致性是90% (Cohen’s Kappa= 0.66），81%（n = 35）的第一份sock样本和86%（n = 36）第二份sock样本都
超过104.5/g病原菌。
结论与讨论
研究表明，从一组猪使用混合粪便样本和sock样本的 qPCR结果之间存在一致性。Sock样品具有重复性。sock采样技术提供了一个非常容易和廉价的方式获得的qPCR检测的猪粪便。我们建议使用qPCR
方法检测sock样品来诊断猪群非感染性腹泻。
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