仔猪免疫CIRCOVAC®后的细胞免疫：在SPF免疫猪中抗原持续表达的初步结果

来源：湖南新南方养殖服务公司 2015-06-03 14:21:56| 查看：次

中国养猪网讯：

　　引言

　　PCV2是引起断奶仔猪多系统衰竭综合征(PMWS)和其他涉及PCV2相关综合征(PCVD)的病原。本研究的目的是为了更好地弄清楚，仔猪免疫CIRCOVAC疫苗后，导致这种免疫反应效果的机制。

　　材料与方法

　　实验设计：

　　研究1：挑选11头3周龄的SPF猪。3头仔猪不免疫(NV)，8头免疫(V)0.5mLCIRCOVAC，免疫当天为计为D0。分别在D21和D49采集所有仔猪的血样。

　　研究2：挑选21头3周龄SPF猪，分成3组。第1组(V1)免疫0.5 mL CIRCOVAC(在D0天免疫佐剂灭活PCV2病毒)，第2组(V2)在D0天免疫用一种实验佐剂灭活的相同的PCV抗原，第3组(NV)不免疫。从D0-D125天内，每3周采集一次所有的仔猪血样。

　　实验室检测：

　　分离外周血单核细胞(PBMCs)，并且用细胞分选器MACS技术中磁珠间接分选法获取不同细胞，特异性抗猪CD5细胞和SWC3单克隆抗体。

　　通过流式细胞术研究不同亚型的表型。PCV2-特异性反应细胞的功能用IFN-γ酶联免疫斑点测定法(ELIspot)和通过流式细胞术进行扩散分析。本研究开发PCV2特异的记忆反应的监测工具。

　　结果

　　在第一个研究中，免疫猪D21与未免疫猪相比，PCV2VLP再次刺激外周单核细胞获得IFN-γ的生产细胞要明显高一些(p<0.05)。同样，只有在CIRCOVAC接种仔猪的IFN-γ反应能够在所有的检测条件下都能检测到，包括不相关抗原的再次刺激或仅仅缺少抗原的刺激。这种观察在第二个研究41天进一步的确认。

　　这些观察提示我们，调查是否一些PCV2抗原呈递细胞在CIRCOVAC免疫动物体内可以长期存留，解释了在那些免疫猪中单独再刺激的条件下观察到持续IFN-γ的应答。

　　不同部分细胞准备如下：SwC3+残余的PBMCs;丰富的CD5+细胞碎片;纯化的SwC3+细胞碎片。

　　用无PCV2特异性再次刺激的不同细胞碎片进行IFN-γELISPOT(IFN-γ酶联免疫斑点测定法)测定。结果见表1。

　　有趣的是，CIRCOVAC免疫动物仅分到SwC3+和CD5+组合，允许产生IFN-γ从而支持我们的假设，抗原呈递细胞运送PCV2抗原，并在持续方式中抗原递呈给T细胞的能力。

　　结论与讨论

　　CIRCOVAC疫苗免疫仔猪中，从免疫猪中纯化的CD5+细胞和SWC3+细胞共同培养，在无任何来自体内的抗原刺激时能够导致IFN-γ产生。

　　结果表明，在免疫猪中，CIRCOVAC允许长期的抗PCV2的细胞免疫应答。进一步描述我们最初的观察，通过CIRCOVAC引起的免疫反应分开鉴定体液和细胞因子，并与一种新的实验室佐剂诱导的应答反应进行比较。

　　备注：®CIRCOVAC是梅里亚在法国和其他地方的注册商标。所有的标记都分别是他们的特性。免责声明：本研究仅供科学研究使用。在此，引用任何一个品牌或商标仅作信息使用，非商业目的，或解释权归商标或品牌所有者。

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