利用基因组学鉴定与蓝耳病毒疫苗有效性相关的宿主细胞分子路径

来源：湖南新南方养殖服务公司 2015-06-02 16:03:02| 查看：次

中国养猪网讯:

　　1.引言

　　猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）与免疫系统最初的相互作用对于免疫和临床结果是至关重要的。蓝耳病毒感染与机体无效的或异常的免疫反应有关：弱的、延迟的中和抗体反应以及由不稳定的γ干扰素所产生的T细胞特异性反应。能够预测的具有保护力的相关疫苗的缺失很大程度上阻碍了有效蓝耳疫苗的发展。本研究的目的是为了确定是否系统生物学（1）能够用于鉴定机体与蓝耳病毒疫苗反应相关的分子路径，这些“好的”和“差的”蓝耳病毒疫苗反应以γ-IFN分泌细胞反应的强度来体现。

　　2.材料与方法

　　4周龄的长大白猪以肌肉注射的方式免疫（n=32）基因1型商业疫苗（2ml，按照厂家说明书稀释），同时对照猪（n=10）接种无菌的生理盐水。为了获得外周血单核细胞（PBMCs），收集免疫后6周并用肝素处理过的血清样本。通过之前描述（2）的ELISPOT方法测定疫苗特异性γ-IFN分泌细胞。同时，用含10%胎牛血清的MEM培养液，磷酸缓冲溶液（10μg/mL）和疫苗（moi=0.1）各一份培养每只动物的外周血单核细胞。

　　ELISPOT结果以每500.000PBMCs（Media± SD）所含有的蓝耳病毒特异性IFN-γ分泌细胞数量来表示。使用标准的方法（3）抽提外周血单核细胞的总RNA。RNA质量被评估，样品在Affymetrix Snowball microarray platform（4）上进行分析。使用Partek genomic suite软件鉴定那些错误发现率（FDR）小于0.2的调节转率本。同时，使用Ingenuity pathway analysis (IPA)软件进一步分析基因列表。

　　3.结果

　　小猪分成2个疫苗组：“好的应答组”(n=3)和“差的应答组”（n=3），其分别拥有高的（54.3±8.1）和低的（22.3±4.5）γ干扰素分泌细胞值。非免疫对照组数据在基因组分析中用作标准值。相对于“好的应答组”(FDR<0.2, P<0.001) (图1)，在“差的应答组”里有更多数量的转录本出现下调。IPA结果显示γ-IFN在“好的应答反应”猪中通过6(P<4.9 10-9) γ-IFN调节分子路径抑制上游调节因子，而在“差的应答组”中则通过28(P<3.3 10-20)γ-IFN调节分子路径抑制上游调节因子（图2）。编码急性期蛋白质和炎性因子的不同调节转录本也同时被鉴定出来。