不同1型蓝耳病毒分离株在巨噬细胞和树突状细胞中诱导细胞凋亡的差异

来源：湖南新南方养殖服务公司 2015-06-02 16:00:00| 查看：次

中国养猪网讯:

　　引言

　　不同的蓝耳病毒株可能发挥不同的免疫特性（1）。目前，蓝耳病毒能够在猪肺泡巨噬细胞（PAM）和不同类型的树突状细胞中复制，如来源于骨髓的树突状细胞（BMDC）和来源于单核细胞的树突状细胞（MoDC）（2）。在感染细胞内，蓝耳病毒可能通过诱导细胞坏死而损伤靶细胞，但也有可能诱导临近细胞的凋亡。本研究的主要目的是评估3种不同蓝耳病毒株分别在不同的易感细胞内诱导细胞凋亡的可能性。

　　材料和方法

　　本研究所用细胞均来自3周龄蓝耳病毒阴性仔猪。BMDC和MoDC细胞按之前报道的方法获得（3）。本研究所用3种1型蓝耳病毒株分别为3249、3262和3267（1,4）。在37℃培养条件下，用不同的蓝耳病毒按0.1的感染复数（MOI）分别感染PAM、BMDC和MoDC细胞，在孵育19、30和60小时后分别检查其诱导细胞凋亡情况。收获的细胞用3%多聚甲醛固定过夜，然后用异硫氰酸荧光素标记的抗半胱天冬酶3（anti-caspase-3-FITC）抗体和抗蓝耳病毒Alexa610-PE（N蛋白）抗体孵育，并用荧光显微镜读取测定的荧光值，用定量PCR（qRT-PCR）测定病毒的复制数。

　　结果

　　本研究通过感染不同类型细胞首先揭示了蓝耳病毒对不同类型细胞的易感性不一样。在孵育19小时的PAM和MoDC细胞中N蛋白被清晰的标记，而在BMDC细胞中观察不到，直到孵育晚期才看到清晰的标记。定量PCR（qRT-PCR）结果显示，病毒株3262的复制强度不如其他2个病毒株。关于细胞凋亡，3种蓝耳病毒株都能在孵育19小时后诱导PAM临近细胞凋亡，但诱导程度存在差异。病毒株3267能够强烈诱导PAM临近细胞的凋亡，而病毒株3260仅仅在半胱天冬酶3阳性细胞中观察到细胞凋亡情况。该结果是与病毒的复制强度一致的，如图中被N蛋白标记所示（图1）。同样，在MoDC细胞中病毒株3267也是诱导细胞凋亡最强列的病毒之一，但其复制强度弱于在PAM中的复制强度。在BMDC细胞中，病毒孵育60小时仍观察不到明显的细胞凋亡现象。