接种汉普森短螺旋体进化枝1（加拿大分离30599）复制粘液出血性下痢实验
来源：湖南新南方养殖服务公司 2015-05-27 16:27:47| 查看：次前言
在2011年粘液性腹泻育成猪血液中，首次从加拿大诊断出汉普森短螺旋体进化枝1。这是一件独特事情，由于以前我们实验室诊断汉普森短螺旋体为进化枝2。自从首次诊断出来后，我们已经确认，从7个猪场另外19例腹泻病例缺乏其他细螺旋体。本文研究目的是确定加拿大分离汉普森短螺旋体进化枝1对猪具有致病性。
材料和方法
11头5周龄猪，通过细菌培养和/或者PCR检测猪痢疾短螺旋体，多毛短螺旋体，弱溶血性螺旋体和汉普森短螺旋体阴性，连续3天一夜迅速灌胃接种108基因组当量汉普森短螺旋体。6头猪相似假装灌胃接种并放置于单独栏舍。所有饲喂商业性，非药物饲料。每天收集粪便并统一评分（0=正常，1=水泥样，2=水样，3=粘液样，4=血样）。接种猪安乐处死，并在临床症状表现高峰时期或非腹泻的13dpi进行尸检。对照组在14dpi尸检，粪便和结肠末端培养分离短螺旋体（BJ和CVS琼脂）。接触性采集96小时内检测出溶血区域，常规处理并进行氮氧化合物基因测序。用内部荧光标记RT-PCR检测粪样和结肠中，汉普森短螺旋体进化枝1浓度（复制数/g）。结束阶段采集样品检测胞内劳森俊（Li），沙门氏菌，猪繁殖和呼吸障碍综合征病毒（PRRSV）和2型圆环（PCV2）。
结果
在7和10dpi之间时，9/11接种猪发展为严重腹泻（8头血样，1头粘液样），在8到12dpi时结束。在4dpi时，1/6对照猪头表现为水样腹泻。在7/11接种猪中观察到温和到严重结肠炎猪，但对照猪中没有。
所有猪检测沙门氏菌，Li，PRRSV和PCV2阴性。9/11接种猪的结肠分离出汉普森短螺旋体进化枝1，但对照猪没有。从剩下2头接种猪和3/6对照猪的结肠分离出汉普森短螺旋体。汉普森短螺旋体在结肠浓度范
围从106到109基因当量/g。在对照猪结肠和粪便中未鉴定出汉普森短螺旋体。
所有接种猪粪便中存在汉普森短螺旋体。在5.4（±1.6）dpi，开始出现在粪便中。在2头接种，但没有发生腹泻的猪，出现限制到一天和低含量水平（~105基因当量/g）。接种猪发展到血样或粘液样腹泻，
多天后检出高的浓度。浓度峰值范围在107到1011基因当量/g。9/11头接种猪观察到从温和到严重伴有坏死的粘脓性结肠炎为微观病变特征。对照猪中2头有温和病变，未进行描述。这些猪都没有发展为腹泻。
结论及讨论
本实验确认，加拿大敏感猪分离30599汉普森短螺旋体进化枝1具有致病性。而且，没有要求进行采食操作，如饲喂大量黄豆粉诱导粘液出血性结肠炎。尽管目前没有设计实验比较汉普森短螺旋体进化枝1
和2的致病性或毒力，本实验按要求出现的粘液出血性腹泻与先前实验相似，评价汉普森短螺旋体进化枝2（加拿大分离30446）的致病性1。Burrough等也复制出血性腹泻按汉普森短螺旋体实验要求2，使用进
化枝2和广泛存在汉普森短螺旋体进化枝1中强溶血性的分离株。在没有猪痢疾短螺旋体的诊断样品中，汉普森短螺旋体进化枝1和2检出率和分离率较高，这些结果证实从2009年加拿大西部正暴发的粘液出血性
腹泻具有有因果关系。
参考文献
1. Rubin JE, et al. 2013. PLoS One. 8:e57146.
2. Burrough ER, et al. 2012. J. Vet. Diagn. Invest. 24:1025-1034.
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