16元/头份！普莱柯重磅推出纯病毒样颗粒基因工程圆环苗！

来源：农财宝典畜牧版 2017-11-20 13:41:51| 查看：次

2017年11月19日，普莱柯生物工程股份有限公司纯病毒样颗粒猪圆环病毒2型基因工程亚单位疫苗（大肠杆菌源）——“圆柯欣”上市发布会在广州召开。这是普莱柯继2010年猪圆环病毒2型灭活苗上市之后，推出的全新的纯病毒样颗粒基因工程圆环疫苗。仔猪单针免疫1ml可保护至出栏，发布会定价16元/头份。

普莱柯“纯病毒样颗粒”基因工程圆环苗如何做到极致优化

　　2017年11月19日，普莱柯生物工程股份有限公司纯病毒样颗粒猪圆环病毒2型基因工程亚单位疫苗（大肠杆菌源）——“圆柯欣”上市发布会在广州召开。这是普莱柯继2010年猪圆环病毒2型灭活苗上市之后，推出的全新的纯病毒样颗粒基因工程圆环疫苗。仔猪单针免疫1ml可保护至出栏，发布会定价16元/头份。

　　圆环疫苗自上市以来一直是疫苗厂家的必争之地，随着我国生猪养殖集约化程度的不断提高，对猪圆环病毒2型疫苗的市场需求持续增加，目前全国猪圆环病毒2型疫苗市场容量在15亿元左右。据中国兽药协会《兽药产业发展报告》显示，国内兽用疫苗生产企业在2012年度、2013年度、2014年度、2015年度该产品市场销售额分别为2.74亿元、5.02亿元、5.85亿元、6.75亿元（上述数据均不含进口），年复合增长率为35.06％，呈现快速增长态势。

　　但是猪圆环病毒2型疫苗产品同时也面临着同质化严重的问题。随着近年来基因工程技术越来越多地应用于疫苗研制领域，基因工程圆环病毒2型疫苗也逐渐成为研究趋势。实际上至今为止市场上包括外企在内仅有5个基因工程圆环产品，因此被认为是圆环苗“红海”中的“蓝海”。

　　普莱柯生物董事长张许科谈普莱柯发展历程与“圆柯欣”的优势

　　技术积累+平台合作，“圆柯欣”具有四大优势

　　普莱柯生物董事长张许科在发布会上讲到，普莱柯自创办以来一直以为用户创造价值和服务为理念，20余年来坚持“创新成就未来”的发展理念、不忘初心，为用户提供满意的产品和服务。

　　“Pulike，源于Public+like，即做用户满意的产品和服务。”张许科介绍，普莱柯于2002年进入生物制品领域，针对因频繁免疫增加生产负担和动物应激的市场痛点，从禽用多联多价疫苗开始，创造了全球首个禽流感三联和四联疫苗。

　　2009年国家兽用药品工程技术研究中心落户普莱柯。

　　2010年普莱柯进入猪用疫苗领域，与南京农业大学联合研发了国内第一个猪圆环病毒2型灭活苗。

　　2015年普莱柯在上交所成功上市，成为行业内8家疫苗上市企业之一。

　　2016年，普莱柯与哈兽研国家禽流感参考实验室联合首创研发鸡新支流（Re-9）基因工程三联灭活苗。“

　　普莱柯早在1995年便确立了创新成就未来的发展理念，目前，公司拥有经国家科技部批准组建的国家兽用药品工程技术研究中心，同时与多个高校和研发平台合作，拥有国内领先、国际先进的技术平台。”

发布会现场

　　本次发布的猪圆环病毒2型基因工程亚单位疫苗（大肠杆菌源）——圆柯欣，是普莱柯公司主持承担的河南省重大科技专项——《四种新型基因工程动物疫苗研发及产业化》成果之一，拥有自主知识产权，已于2017年10月16日获国家新兽药注册证书。

　　该产品研发历时7年，以国家兽用药品工程技术研究中心为依托，与新加坡国立大学生物科学系终身教授袁于人合作，成功突破“可溶性蛋白的表达、高纯度Cap蛋白获取、病毒样颗粒组装”三大技术难题，将Cap蛋白纯度提升至95%，并使近100%的Cap蛋白组装成病毒样颗粒，研制成功了真正意义上的纯病毒样颗粒猪圆环病毒2型基因工程亚单位疫苗。

　　张许科表示，以上技术突破和创新使得“圆柯欣”拥有4大优势：

1、抗原纯、含量高；2、病毒样颗粒组装效率高；
3、专利水性佐剂，使用方便；4、一次免疫，全程保护。

新加坡国立大学生物科学系终身教授袁于人阐述“圆柯欣”上游研发历程

　　袁于人：大肠杆菌系统是病毒样颗粒圆环苗的最佳选择

　　新加坡国立大学生物科学系终身教授袁于人在发布会上详细阐述了圆环病毒样颗粒的研发历程。袁于人介绍，圆环病毒样颗粒的研发包含表达序列选择、表达系统选择、表达质粒构建、基因工程菌的改造与蛋白表达、病毒样颗粒的组装与解析5个步骤。

　　首先，通过生物信息学和结构信息学比对和分析，选择的序列表达的Cap蛋白组成的病毒样颗粒需要能够保护现在、未来的PCV2感染。

　　然后是选择表达系统，袁于人介绍，当前拥有细菌（大肠杆菌）、酵母（酿酒酵母）、昆虫细胞/杆状病毒、哺乳动物细胞（CHO）、植物细胞5种表达系统，而这些系统是没有好坏之分的，只有合适与不合适之别。大肠杆菌和杆状病毒系统都能表达出正确的VLPs，但“不是我们不能做其它的表达系统，而是我们认为大肠杆菌对这个疫苗来说是最好的。”袁于人说，“之所以选择大肠杆菌表达系统，是因为大肠杆菌具有表达量高、成本较低、易规模放大等优势。

　　当然并不是所有的产品有可以用大肠杆菌做，像猪瘟就不能用大肠杆菌系统做。而PCV2 Cap蛋白非囊膜蛋白，没有穿膜结构，无二硫键、无糖基化等翻译后修饰，同时PCV2的衣壳蛋白间是通过范德华力相互作用，没有化学键，只需要表达出Cap蛋白单体就可以实现病毒样颗粒的组装，因此恰恰就适合使用大肠杆菌进行表达。”

发布会现场认真记录的嘉宾

　　“好的产品是设计出来的，其次是持之以恒的不断优化。”袁于人说。他介绍，通过对Cap蛋白基因序列的优化，提高了其在大肠杆菌中的可溶性表达量。随后对表达载体和工程菌株进行了筛选与改造，在工程菌基因组插入稀有tRNA基因，也有利于大肠杆菌表达。通过基因重组技术，切断大肠杆菌部分内毒素通路，可减少菌体内毒素含量。菌株构建完成后，进一步实现高密度发酵同时可溶性表达、成本可控的纯化。

　　“整个研发过程经历了7年，其中3-4年都是在精益求精，不断优化。”袁于人说。

国家兽用药品工程技术研究中心主任田克恭讲述“圆柯欣”从实验室到生产的研发历程

　　95%的Cap蛋白纯度组装近100%正确纯病毒样颗粒

　　Cap蛋白表达后的正确组装是疫苗发挥效用的关键，只有正确组装成病毒样颗粒，才有免疫原性。袁于人在发布会上介绍，Cap蛋白纯度越高，组装的病毒样颗粒完整度、均匀度就会越高，只有纯化到95%以上，再通过组装条件优化，才能在电镜下观察到大量组装完整、均一的VLPs。

　　据介绍，圆柯欣经过超滤、盐析和多步蛋白层析，纯化后蛋白纯度可达到95%以上。

　　那么如何确定表达的Cap蛋白是100%组装成了与天然病毒一样的VLPs？袁于人随后介绍了研发过程中对病毒样颗粒的解析：通过圆二色光谱测定Cap蛋白二级结构，显示表达Cap蛋白与PCV2病毒衣壳蛋白二级结构高度吻合；通过晶体衍射揭示三级结构，显示表达的Cap蛋白拥有正确的三级结构，并且VLPs组装正确；通过冷冻电镜分析，表明组装的VLPs具有与全病毒相同的表面抗原决定簇；通过动态光散射分析（DLS）测定，显示接近100%的Cap蛋白已经组装成VLPs。

　普莱柯生物总经理秦德超讲述“圆柯欣”的产品参数与临床应用试验效果

　　实现高效发酵、纯化、组装，1次1毫升1生保护

　　在实验室条件下表达、组装成功病毒样颗粒之后，产业化的道路才刚刚开始。国家兽用药品工程技术研究中心主任田克恭介绍了该疫苗从病毒样颗粒的规模化放大生产、安全性有效性评价、佐剂筛选、临床实验、质量检验等过程。田克恭表示，圆柯欣现在已经实现1000L规模全自动、高密度、高可溶性蛋白表达、高纯度蛋白纯化和高效VLPs组装。先期试制的3批实验室制品安全、有效，在4个猪场试验的11274头猪只上具有良好的安全性和有效性。

田克恭讲述“圆柯欣”的安全性和有效性实验过程

　　普莱柯生物总经理秦德超介绍了圆柯欣产品指标。1ml疫苗中有效抗原可达100微克，Cap蛋白纯度95%，100%组装病毒样颗粒，125EU/ml内毒素企业内控标准（接近人用疫苗水平）。根据秦德超展示的12816头猪临床试用数据，疫苗副反应率低至0.018%，平均日增重311克、平均料肉比1.68、死淘率3.5%，各项指标均接近与进口圆环苗产品接近。秦德超表示，圆柯欣将可以实现商品猪1毫升、1次、1生（6个月）的保护。

秦德超展示“圆柯欣”产品样品

　　农财宝典记者在发布会现场了解到，以尖端的研发、精雕细琢的优化、成功的量产工艺加持，“圆柯欣”将可以在一段时间内保持技术领先。实际上当前单头份价格超过15元的圆环疫苗寥寥可数，其定位必然也是一款面向高端用户的高端产品。秦德超表示16元/头份的定价实际上体现了该产品能提供给用户的价值，同时提醒用户关注产品的“性价比”。现场多名专家与养殖企业代表均表示其今后的现场应用和市场表现值得期待。